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2.實(shí)驗(yàn)方法與數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)中采用激光誘導(dǎo)熒光(LIF)與光纖光譜技術(shù)結(jié)合來測量水體中葉綠素α的熒光發(fā)射光譜。實(shí)驗(yàn)所用主要儀器有:美國海洋光學(xué)公司生產(chǎn)的HR-2000系列光纖光譜儀,輸出功率10mW的紅光半導(dǎo)體激光器(660nm),計算機(jī),量筒,無水乙醇,器皿等。實(shí)驗(yàn)裝置示意圖如圖1所示:
實(shí)驗(yàn)具體過程如下:用圖1所示實(shí)驗(yàn)裝置先測得不放葉綠素樣品時乙醇溶液在激光照射下的透射光譜,如圖2所示;采集新鮮樹葉若干,剪碎研磨后用高純度的無水乙醇5ml配成標(biāo)準(zhǔn)溶液,濃度記為c0,用相同實(shí)驗(yàn)裝置測得該濃度下葉綠素α的熒光發(fā)射光譜,相對熒光峰值強(qiáng)度記為F0;然后逐步添加無水乙醇稀釋成6ml、8ml和10ml的三種不同濃度的溶液,稀釋后的溶液濃度依次記為5c0/6、5c0/8和c0/2,用相同的方法分別測得不同濃度下對應(yīng)的熒光發(fā)射光譜,相應(yīng)的熒光峰值強(qiáng)度記為F1、F2和F3,測得熒光發(fā)射光譜和實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)分別如圖3,表1所示:
比較圖2,圖3可以看出,圖2只有一個峰(660nm),實(shí)際上是激勵光的光譜。兩者區(qū)別在于加入葉綠素樣品后在685nm附近明顯出現(xiàn)了一個熒光峰,由此可以判斷其為葉綠素α所產(chǎn)生的熒光。由于不同濃度的葉綠素α在685nm處均有一個明顯的熒光發(fā)射峰,且峰值強(qiáng)度隨濃度的減小而降低;兩者的具體關(guān)系通過分析表1中數(shù)據(jù)可看出,葉綠素α的相對熒光峰值強(qiáng)度與其濃度近似成線性,這與理論相吻合,因此可以通過獲取葉綠素α的熒光發(fā)射光譜來估算水體中葉綠素α的濃度。